牛胰岛素样生长因子结合蛋白-3(IGFBP-3)酶联免疫分析（ELISA）
试剂盒使用说明书
本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定牛血清，血浆及相关液体样本中胰岛素样生长因子结合蛋白-3(IGFBP-3)的含量。
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实验原理：
本试剂盒应用夹心法测定标本中牛胰岛素样生长因子结合蛋白-3(IGFBP-3)水平。用纯化的牛胰岛素样生长因子结合蛋白-3(IGFBP-3)抗体包被微孔板，往微孔中依次加入IGFBP-3，再与HRP标记的IGFBP-3抗体结合，形成免疫复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的胰岛素样生长因子结合蛋白-3(IGFBP-3)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中牛胰岛素样生长因子结合蛋白-3(IGFBP-3)浓度。
试剂盒组成：
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试剂盒组成 |
48孔配置 |
96孔配置 |
保存 |
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说明书 |
1份 |
1份 |
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封板膜 |
2片（48） |
2片（96） |
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密封袋 |
1个 |
1个 |
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酶标包被板 |
1×48 |
1×96 |
2 |
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标准品：90μg/L |
0.5ml×1瓶 |
0.5ml×1瓶 |
2 |
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标准品稀释液 |
1.5ml×1瓶 |
1.5ml×1瓶 |
2 |
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酶标试剂 |
3 ml×1瓶 |
6 ml×1瓶 |
2 |
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样品稀释液 |
3 ml×1瓶 |
6 ml×1瓶 |
2 |
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显色剂A液 |
3 ml×1瓶 |
6 ml×1瓶 |
2 |
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显色剂B液 |
3 ml×1瓶 |
6 ml×1瓶 |
2 |
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终止液 |
3ml×1瓶 |
6ml×1瓶 |
2 |
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浓缩洗涤液 |
（20ml×20倍）×1瓶 |
（20ml×30倍）×1瓶 |
2 |
样本处理及要求：
1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
5. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速