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eBioscience磷酸化抗体破膜缓冲液选择指南

作者：杭州联科生物技术股份有限公司 2015-01-20T23:34 (访问量:4405)

eBioscience磷酸化抗体都经过三种buffer（IC fixation and permeabilization, Foxp3/Transcription Factor Buffer, and IC fixation Buffer/Methanol的测试，在抗体说明书上详细告知了最适buffer的种类。由于甲醇会毁坏某些抗体识别的表位，理想的状况是在甲醇作用前做表面marker的标记，这些marker的抗体可以选择甲醇耐受的荧光标记，如eFluor450、FITC或eFluor660。

然而另一方面，表面抗体与细胞的结合可能也会引起不必要的激活。

所以，我们推荐在刺激/处理、固定及甲醇处理之后来做表面抗体的标记，不受固定过程影响的抗体克隆号选择，可参考前面的文章“固定破膜对细胞表面抗体的影响”，来源：http://us.ebioscience.com/resources/application/flow-cytometry/clone-performance-after-fix-perm.htm

Target	Clone	IC fix/perm	Foxp3	IC fix/methanol
pSTAT1 (Y701)	KIKSI0803	-	-	+++
pSTAT4 (Y693)	4LURPIE	-	-	+++
pSTAT5 (Y694)	SRBCZX	-	-	+++
pSTAT6 (Y641)	CHI2S4N	-	-	+++
pSrc (Y418)	SC1T2M3	++	++	+++
pZAP-70/SYK Y319/Y352	n3kobu5	++	++	+++
pSYK (Y348)	moch1ct	++	++	+++
pBTK/ITK (Y551/Y511)	M4G3LN	++	++	+++
pERK1/2 (T202/Y204)	MILAN8R	-	-	+++
pNFkB p65 (S529)	B33B4WP	+++	-	+++
pS6 (Y235/Y236)	cupk43k	+++	++	+++
pH2AX (S139)	CR55T33	-	+++	+++

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