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警惕细胞“拖延症”!

作者:无锡耐思生命科技股份有限公司 2022-04-01T10:12 (访问量:5825)


什么是细胞迁移能力?

细胞迁移是最古老也是最重要的动物细胞生理活动之一,看似简单的一个动作实际上是高度动态和协调的复杂过程,包括胞外信号诱导、微丝系统提供动力、整合素介导的黏附结构提供附着力等。

细胞跨出的每一小步,是机体化学调控的一大步,在胚胎发育、组织形成、免疫活动、损伤修复等生理过程,以及炎症、癌症转移等病理过程中都有着极其重要的作用。

因此拒绝细胞“拖延症”,密切关注细胞迁移能力,成为细胞诊断的必修课!

 

什么是细胞小室?

 

细胞小室在细胞实验中很常用。这是一类有通透性的杯状的装置,可以认为这是一种膜滤器,也可认为是一种有通透性的支架。

 

上室底部的薄膜是整个实验装置的核心部分,需要具有通透性、可观察性、高化学兼容性。

NEST选用具有全面化学适用性的聚酯膜及聚碳酯膜,通过TC处理后便于细胞贴壁培养。

聚碳酸酯膜(PC)

膜孔密度较高,允许通过膜完成更多交换,而且具有优秀的细胞粘附特性,所以适用于转运研究和其他需要实现最佳细胞生长的应用。

另外PC膜也非常适用于屏障分析。在较长时段内相比其他膜材料,具有更高、更持续且更稳定的跨上皮电阻 (TEER) 值。PC膜无需基质包被即可培养大多数类型细胞。

聚脂膜(PET)

PET膜孔密度较低,具有更好的光学清晰度,有利于显微镜细胞观察以及细胞成像。

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待测细胞的直径决定了薄膜孔径的选择。通常情况下,薄膜的孔径应略小于细胞的直径以防止细胞直接漏入到下室。

NEST提供多种规格孔径,满足共培养实验、趋化实验、细胞迁移实验、细胞侵袭以及药物转运多种需求。

 

小于 3μm 孔径的小室,细胞不会迁移通过。涉及到细胞迁移的实验,要用 5.0、8.0μm的小室,这样上室细胞可穿过聚碳酸酯膜进入下室。

 

 

鉴定方式

1)首先,细胞处理∶处于对数生长期的细胞,消化细胞,终止消化后离心弃去培养液,用PBS洗1-2遍,用无血清培养基重悬。

2)铺板∶24孔板下加入600ul含10%FBS的培养基,取细胞悬液150μl加入细胞小室,每孔,10000个细胞。

3)细胞培养∶37℃、5%CO2培养箱中培养20~24h。

4)固定∶取出细胞小室,弃去孔中培养液、用无钙的PBS洗2遍,4%多聚甲醛固定30分钟甚至过夜。

5)染色∶0.1%结晶紫染色20 min,用棉签轻轻擦掉上层未迁移细胞,用PBS洗3遍。

6)显微镜下计数。

注意事项

1.细胞计数时一定要尽量严格,以保证各孔细胞密度均匀。为了避免各孔间由于细胞计数引入的误差,一般需要重复三个副孔。

2.种细胞时尽量从孔的中间位置滴加,力度柔和,速度尽量慢,以免冲击力太大破坏胶面;

3.避免气泡产生。注意小室底部气泡的产生。小室在放入孔板时,常常会因为液体表面张力的原因在小室底部形成气泡,气泡导致的底部液面不均会严重影响细胞侵袭和迁移能力, 因此在放置小室时,应轻柔匀速,若发现底部产生气泡,不要拍打板子(这样做会使刚铺好的细胞重新聚团),而应将小室轻轻提起,重新放置直至无气泡。

 

诊断报告

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